在细胞体外培养过程中，污染就像一个潜伏的“隐形杀手”，时刻威胁着实验的准确性与稳定性。在众多污染源中，支原体污染以30%-60%的超高发生率，成为科研人员面临的主要挑战之一。本期将全方位解析支原体污染的防治要点，助你轻松应对这一实验室“顽疾”，为细胞培养实验保驾护航。

什么是支原体？

支原体（Mycoplasma），又称霉形体，属于柔膜体纲（Mollicutes），是已知的最小原核生物之一，其结构由脂蛋白膜、核糖体和圆形双链DNA组成。支原体能够在无生命培养基上生长，但其生物合成能力有限，必须依赖外源营养成分。细胞培养体系为支原体提供了适宜的生长条件，使得其在培养中繁殖成为可能。此外，支原体具有附着在宿主细胞表面的能力，并且对多种常用抗生素具有耐药性，这也为其滋生和污染埋下了隐患。

支原体污染的表现

自然界中支原体种类超过120种，而细胞培养中常见的污染菌株包括牛精氨酸支原体、发酵支原体等。这些菌株污染细胞后，导致细胞出现一系列特征性改变，如生长速率异常、形态改变、染色体异常等。这些变化虽然缺乏特异性，但会严重干扰细胞的正常生理状态，造成实验结果的失真。由于支原体直径仅为0.1-0.3μm，且无细胞壁，常规光学显微镜难以识别，因此，任何不明原因的细胞生长或形态异常都需要优先考虑支原体污染的可能性。

支原体污染检测

精准检测是防治支原体污染的关键。常见的支原体检测方法包括观察法、培养法、免疫法、DNA荧光染色法、分子法和发光法。其中，培养法被认为是金标准，但其周期较长，而qPCR则是灵敏度最高的快速检测方法。

支原体清除方法

在细胞培养过程中，发现支原体污染后，及时有效的清除至关重要。清除支原体的核心在于破坏其脂蛋白膜结构和抑制关键的代谢途径。以下是几种常见的清除方法：

1. 热处理法：支原体耐受的温度范围在35-37℃，通过将污染细胞置于41℃处理5-10小时，可以有效杀灭支原体。但需注意，此方法可能对细胞造成损伤。

2. 抗生素法：支原体对某些抗生素（如卡那霉素、四环素等）敏感，通过在含抗生素的培养基中传代培养细胞，检测支原体阴性即可确认清除成功。然而，过度使用抗生素则可能导致耐药性或毒性反应，需谨慎操作。

3. 复合支原体清除试剂：推荐使用含有抗生素和脂蛋白膜穿透剂的复合型支原体清除试剂，如Z6·尊龙凯时的相关产品。该方法操作简便，效果显著，同时对细胞的毒性较小，能够较好地保持细胞活性。

清除后需通过qPCR、DNA荧光染色等方法进行检测，以确认支原体是否已被完全清除，避免试剂残留或支原体复苏导致假阴性结果。

结论

支原体虽然微小，却是细胞培养中极具破坏性的污染源。只有了解其特性、及时发现污染信号，并运用恰当的检测与清除手段，才能真正保护细胞实验的可靠性与稳定性。了解更多关于细胞培养的知识，请关注Z6·尊龙凯时，您身边的细胞培养专家！