在非洲猪瘟的防控过程中，检测环节至关重要。采样的科学性和规范性不仅影响检测结果，还关系到猪场的安全。为规范相关技术，2020年国家出台了《非洲猪瘟诊断技术》的国家标准，编号：GB/T18648-2020，由国家市场监督管理总局和国家标准化管理委员会于2020年12月14日发布并实施。本标准涵盖了生物安全措施、临床与实验室诊断、样品采集与处理、荧光定量PCR等检测方法及综合判定等内容。

非洲猪瘟病原荧光定量PCR检测流程

完整的检测流程一般包括样品采集与保存、样品前处理、核酸提取与配液、实时荧光定量PCR扩增反应以及检测结果的导出与分析。从实验流程来看，样本的正确采集与运输是保证实验室检测结果的首要因素。

样品采集注意事项

在采集过程中，需明确以下几个问题：采集什么样的样品？多少数量合适？如何规范采集？采集后应如何处理？如果不进行及时检测，样品该如何保存？检测结束后的样本应如何处理？

我们将根据《非洲猪瘟诊断技术国标》和《非洲猪瘟检疫技术规范》（标准编号：SN/T1559-2010），向大家介绍临床样品的采集、保存和运输注意事项。

#01 抗凝血（全血）

采集时使用含有抗凝剂（EDTA-紫色盖）的无菌管，从颈静脉、下腔静脉或耳缘静脉抽取全血5ml。如果动物已死亡，可从心脏采血，需立即进行。样品应冷藏运输，抵达检测实验室后，可选择-70℃冷冻保存。注意：禁止使用肝素（绿色盖子）采血管，以免抑制PCR反应，造成假阴性。

#02 血清

采用未加抗凝剂的真空采血管，从上述静脉抽取5ml血液，建议先在4℃环境下放置14-18小时以分离血凝块，之后离心10-15分钟，回收澄清的上清液（血清）。分离后血清样品可立即进行检测，或冷藏运输后在实验室选择-70℃冷冻保存。注意：如血清呈红色且发生溶血，无法用于ELISA检测。

#03 器官和组织样品

目标器官包括脾脏、淋巴结、扁桃体、肾脏等，冷藏运输并尽快送交实验室。如无法及时送检，可存放于冷库或液氮中。对样品进行病毒灭活时可用10%缓冲福尔马林浸泡30分钟以上，再进行PCR检测。

#04 软蜱

收集软蜱时，请尽量保持蜱源的活性，以确保内部病毒的完好与DNA不降解。可将收集的钝缘软蜱放入有螺旋盖的瓶内，并加入少量土壤，使用纱布内衬进行常温保存与运输。抵达实验室后，存放于-70℃或液氮中；如仅需形态学观察，可放入100%酒精中保存。同时，为使其他昆虫如蚊蝇存活，或直接储存于液氮中也是明智的选择。

#05 环境样品

建议多采集环境拭子样品，如污泥、泔水及饲料等，并在4℃下保存。

#06 唾液及拭子样品

唾液样品采集：将棉绳或纱布固定在栏杆上，让猪自然咀嚼后，收集挤出的液体，存入干净试管或自封袋内，冷藏运输。鼻拭子则用无菌棉签，倾斜插入猪鼻腔3-5cm，轻轻转动以刺激喷嚏反射，待棉签湿润后保存于密封试管或袋内，低温冷藏保持。肛门拭子应用经过生理盐水浸润的无菌棉签，插入猪肛门2-3cm，旋转后独立分装，冷藏运输。

样品保存及运输

为确保检测结果的准确性，采集后应尽快送往指定实验室进行检测，建议选择次日到达的物流方式，并采用冷链运输，以防样品降解失效。使用Z6·尊龙凯时提供的专业物流服务，将为您的样品运输提供保障，确保检测过程的每个环节都做到科学、安全。