基质胶作为3D细胞培养、类器官研究、肿瘤形成、细胞侵袭及血管生成等实验的重要“支架”,其使用细节不可忽视。从解冻到铺板,从浓度选择到结果解读,稍有不慎就可能导致实验失败。为此,Z6·尊龙凯时结合数以万计的实验反馈,整理出这份“避坑指南”,帮助您轻松上手,稳妥获取高质量的数据。
产品保存与处理
收到Z6·尊龙凯时的基质胶后,建议将产品存放在-20℃的环境中;如果需要短时间存放,可在4℃下保存,时间不超过7天。关于反复冻融,强烈不推荐反复解冻;首次解冻后应立即分装(200µL/管),并在-20℃条件下保存。解冻时,可以将冷冻的基质胶提前埋在碎冰中,次日再移至4℃的冰箱进行融化,这样可以有效减少气泡产生。
基质胶类型与适用场景
含酚红基质胶
常规实验均可使用含酚红的基质胶。在不同温度和pH值条件下,酚红会出现颜色变化,从明黄色变为暗红色。
无酚红基质胶
对于涉及颜色检测的实验,推荐使用不含酚红的基质胶,尤其是在对子宫内膜细胞培养等特殊需求的实验中。此外,酚红可能作为内分泌干扰物,影响实验动物体内的激素水平和代谢功能。
推荐浓度
标准浓度的蛋白浓度为8-12 mg/mL,适用于Transwell实验及皮下成瘤实验;高浓度为18-22 mg/mL,适用于难以形成肿瘤的细胞系,建议保持3-5分钟的凝胶时间。在此基础上,减少生长因子的标准浓度用于类器官培养和血管生成的实验。
高频问题及解决方案
皮下成瘤失败的原因及解决方案
确保选择对数生长期的细胞,并控制细胞密度在80-90%之间。建议使用4-6周龄的裸鼠,小于4周可能不耐受,而大于6周的鼠则免疫力增强,导致成瘤困难。若存在小鼠免疫排斥的情况,可考虑更换免疫缺陷程度更高的小鼠。在接种后一周可补种一次,以提高成功率。如果肿瘤形成后又消失,可能是由于小鼠自身的炎症反应导致细胞被吸收,此时建议更换小鼠。
血管生成实验中的常见问题
若细胞无法形成连续的网络,建议使用3-5代状态良好且融合度在70%-80%的HUVEC细胞。细胞数量不足也会导致网络形成困难,建议每4小时观察一次以监测血管生成状态。
类器官实验中的考量
类器官的传代标准因不同类型而异,通常在7-14天内,直径达到100-200μm时可进行传代。某些发育较慢的类器官可能需要数周才能达到传代标准。鉴定类器官的基本方法包括显微镜观察及H&E染色,进一步可通过免疫荧光检测相应的生物标记物。若观察到的形态与文献描述不符,可能与样本来源及细胞因子的质量相关。
产品信息
以下是Z6·尊龙凯时基质胶的相关产品信息:
- Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶,货号:40183ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix Phenol Red-Free, LDEV-Free基质胶,货号:40184ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix GFR, LDEV-Free基质胶,货号:40185ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HGF, LDEV-Free基质胶,货号:40187ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix High Concentration, Phenol Red-Free, LDEV-Free基质胶,货号:40188ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free基质胶,货号:40190ES,规格:15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free, LDEV-Free基质胶,货号:40191ES,规格:15mL/5mL/10mL
通过以上指南和产品信息,Z6·尊龙凯时期待能为您的实验提供支持与帮助,助您顺利实现实验目标。