1. 目的细胞依据标准细胞培养方案，在血清培养基中进行培养。2. 在检测之前，使用无血清培养基（0.2% BSA）准备。3. 经过一夜在无血清培养基中的培养后，吸出培养基并用PBS进行冲洗。4. 加入胰蛋白酶溶液以启动细胞分离。5. 将细胞悬液转移至试管中，并以350×g离心5分钟。6. 将细胞重新放入预热的细胞培养基中。7. 将细胞悬浮液稀释至每毫升100,000个细胞的接种密度。

1. 向接收板的每个孔中加入200μl的含或不含化学引诱剂的培养基（在此情况下，不同浓度的FCS从0.25%到10%不等）。2. 将准备好的细胞悬液以50μl的量加入膜板各孔中。3. 将细胞培养板放置在37℃、5% CO₂的培养箱中培养24小时。

1. 从接收板各孔中吸出细胞培养基。2. 向接收孔中加入150μl无血清培养基以及8μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM。3. 在37°C、5% CO₂的培养箱中培养45分钟。4. 从膜板和接收板的每个孔中吸出细胞培养基。5. 用PBS冲洗两块板的孔。6. 向接收板中加入胰蛋白酶溶液，以促进膜下侧迁移细胞的脱离。7. 胰蛋白酶溶液孵育10分钟，过程中轻轻摇动。8. 将每孔180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每孔。9. 在激发波长485nm和发射波长520nm的读板器中读取荧光信号。

1. 从膜板各孔吸出培养基。2. 使用预湿棉签，顺时针和逆时针轻轻旋转棉签，以去除膜上部未迁移的细胞。3. 运用绿色通道的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。此外，ThinCert® 96孔HTS小室因其独特的孔结构而具有高透明度，这一特性有助于生物细胞的观察，能够有效检查细胞形态，评估细胞融合，并提高污染监测的准确性和可靠性。因此，每次实验都伴随着对细胞的连续显微镜监测。

在探索更有效的生物标志物、治疗靶点和药物以干预肿瘤转移、血管生成和炎症性疾病等复杂现象方面，体外细胞迁移实验是至关重要的工具。这些实验提供了一个可控的环境，用于测量细胞迁移以及分析不同分子的影响，例如生长因子和趋化因子，或候选药物。在迁移实验中，孔径的精确选择尤为关键，孔径需要与所研究细胞的尺寸成比例，既要具备足够的限制性以防止细胞被动移动，又要具备适当的允许性以促进细胞的主动迁移。下表展示了一般膜孔径选择的建议。

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